哺乳动物的外源基因表达被广泛用于研究基因功能。大多数转基因表达方式为基于质粒载体的简单转染和基于病毒载体的转导。这些方式的主要缺点是随机整合会导致不同实验之间的变化性太大。另一方面, 靶向整合技术使研究者们能够在一个验证过的安全基因位点, 如“安全港位点”,表达他们感兴趣的基因 (GOI),从而避免随机整合造成的副作用,如基因拷贝数目变化、位置效应、内源基因沉默,等等。CIB的科学人员经过反复测试已筛选出对人类19号染色体上腺相关病毒整合位点1(AAVS1)具有高效切割和整合率的CRISPR/Cas9。AAVS1是一个众所周知的“安全港位点”,适用于定点安全表达外源基因。亦可用于在不同细胞系的相同位点的外源基因表达,使得在不同遗传背景间比较基因功能成为可能。


示例 (CRISPR/Cas9):


BACE-1 Alzheimer Disease-related Gene

                        A


                        B

无标题.png

                        C

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A:质粒设计结构;B:junction PCR确认单细胞来源的克隆定点敲入,b-1,为检测的left arm junction PCR 阳性条带大小,b-2为单细胞克隆筛选阳性细胞,根据条带大小判断C1,C2,C3为阳性细胞株。C:基因序列测序图(部分)

 

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