技术平台
三启生物拥有超过10年积淀的体细胞重编程(iPSC)、基因编辑(ZEN/TALEN/CRISPR)、定向分化技术平台,其中高效的iPSC来源造血谱系定向分化技术是这三个平台综合运用能力的体现。四大平台极大提升了通用型现货式免疫细胞药物开发效率,以及再生医学管线的开发潜能。
1.iPSCell® 平台
自2010年以来,体细胞重编程技术一直是CIB的研究重点内容,经过多年的研究,CIB熟练掌握了3种最常用的重编程方案:经典的逆转录病毒重编程、Episome质粒介导的重编程和仙台病毒介导的重编程,其中后面两种重编程为非整合方式,在临床应用方面具有很大潜力。
经过优化整个重编程的流程,我们可以无创获得尿液细胞或血液细胞,并在短期内重编程得到高质量的iPSC,成功率超过90%。这些iPSCs可以定向分化成多种类型的细胞,如神经细胞、心肌细胞、肝脏细、β细胞、RPE细胞等,从而为基础研究、药物开发和个性化医疗提供新工具。
细胞重编程流程及重编程过程中细胞的形态变化
A:hiPSCs多能性标记物检测;B:Transgene外源基因沉默检测;C:体外分化实验(EB形成);D:OCT4和NANOG启动子甲基化分析;E:核型分析;F:FACS检测hiPSCs表面标记物;G畸胎瘤形成实验;H:仙台病毒外源基因整合检测
通过iPSCelll®平台的积累,CIB在细胞株重编程、扩增、质控方面有丰富的经验。目前我们已经得到了来自不同个体和不同组织类型的超过50株iPS细胞株,其中包括超过20株的非整合iPSC细胞株,以及3株临床级别iPS细胞株。
CIB临床级别iPSC细胞株,在工艺、物料、质控、放行等方面上严格符合cGMP标准。
CIB生产的临床级iPS细胞株符合CDE最新颁布的《人源性干细胞及其衍生细胞治疗产品临床试验技术指导原则(试行)》中的管理要求,在物料选择遵循《T/CMBA 021-2023》标准。
2.Cell Designer® 平台
经过精心“设计”的iPS胞可以用于分化成各种特定类型的细胞,如胰岛细胞、神经元、肝细胞等,这些细胞可以用于组织修复、器官移植和其他再生医学应用。
CIB早在2010年就和Sigma-Aldrich ZFN科学家联合开展利用ZFN对iPSC的基因修饰,两年完成超过10株iPSC的基因修饰,目前,CIB的Cell Designer 平台可以基于TALEN,CRISPR进行基因敲入、基因敲除工作。
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基因敲除
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基因修复
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Reporter细胞
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基因过表达
CIB拥有稳定的基因敲除平台,利用TALEN和CRISPR/Cas9,我们可以快速对不同细胞株进行基因敲除
NKX2.5 GFP-PURO/wt KI iPSC构建示意图
基于AAVS1位点的ADAG基因过表达(ADAG:阿尔兹海默症相关基因)
3.PSCDiffer® 平台
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神经干细胞
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多种神经细胞
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肝细胞
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β细胞
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视网膜色素上皮细胞